細(xì)胞培養(yǎng)箱作為細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵設(shè)備，其內(nèi)部環(huán)境的無菌狀態(tài)直接關(guān)系到細(xì)胞培養(yǎng)的質(zhì)量與成敗。因此，掌握科學(xué)有效的消毒滅菌方法至關(guān)重要。
一、消毒滅菌前準(zhǔn)備
清空培養(yǎng)箱首先，需要將培養(yǎng)箱內(nèi)的所有物品，如培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、移液器等實(shí)驗(yàn)器具全部取出，避免在消毒滅菌過程中對(duì)物品造成損壞或影響消毒效果。同時(shí)，對(duì)取出的物品進(jìn)行分類整理，以便后續(xù)分別進(jìn)行清潔和消毒處理。
清潔培養(yǎng)箱內(nèi)部使用干凈的軟布或無紡布蘸取適量的清水或溫和的清潔劑，輕輕擦拭培養(yǎng)箱內(nèi)部的墻壁、擱板、門內(nèi)襯等各個(gè)表面，去除灰塵、污漬以及可能殘留的培養(yǎng)基等物質(zhì)。注意擦拭時(shí)要避免過度用力，防止損壞培養(yǎng)箱的內(nèi)膽涂層。對(duì)于一些難以擦拭的角落和縫隙，可以使用棉簽或小型刷子進(jìn)行清理。
二、常用消毒滅菌方法
1、紫外線照射消毒紫外線消毒是一種較為常用的方法。大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)箱都配備有紫外線燈，開啟紫外線燈后，其發(fā)出的紫外線能夠破壞微生物的DNA結(jié)構(gòu)，從而達(dá)到殺菌消毒的目的。一般照射時(shí)間不少于30分鐘，以確保對(duì)培養(yǎng)箱內(nèi)部各個(gè)角落的微生物進(jìn)行有效殺滅。不過，紫外線的穿透力較弱，對(duì)于一些遮擋部位或物體背面的消毒效果可能會(huì)受到一定影響，所以需要合理擺放物品，保證紫外線能夠充分照射到所有需要消毒的區(qū)域。
2、酒精擦拭消毒可以選用70%-75%的酒精溶液對(duì)培養(yǎng)箱內(nèi)部進(jìn)行擦拭消毒。將適量的酒精倒在干凈的軟布上，然后按照從上到下、從左到右的順序，仔細(xì)擦拭培養(yǎng)箱的內(nèi)壁、擱板等部位。酒精具有較強(qiáng)的揮發(fā)性，擦拭后能快速干燥，不留殘留，且能有效殺滅多種細(xì)菌和病毒。但要注意酒精屬于易燃易爆物品，在使用過程中要遠(yuǎn)離明火，并確保培養(yǎng)箱處于良好的通風(fēng)狀態(tài)，防止酒精揮發(fā)積聚產(chǎn)生爆炸危險(xiǎn)。
3、高溫濕熱消毒（部分適用）對(duì)于一些能夠耐受高溫濕熱的細(xì)胞培養(yǎng)箱部件，如某些金屬材質(zhì)的擱板等，可以采用高溫濕熱消毒的方法。將部件放入高壓蒸汽滅菌鍋中，在合適的溫度（通常為121℃左右）和壓力下，保持一定的時(shí)間（如15-30分鐘），利用高溫高壓的水蒸氣來殺滅微生物。不過，并非所有的細(xì)胞培養(yǎng)箱部件都能進(jìn)行高溫濕熱消毒，比如一些塑料材質(zhì)的部件可能會(huì)因高溫而變形損壞，所以需要謹(jǐn)慎選擇此方法，并嚴(yán)格按照設(shè)備的說明書要求操作。
4、化學(xué)消毒劑熏蒸消毒常用的化學(xué)消毒劑如過氧乙酸、甲醛等可以進(jìn)行熏蒸消毒。以過氧乙酸為例，按照一定的濃度（如0.5%-1%）稀釋后，將盛有消毒劑的容器放入培養(yǎng)箱內(nèi)，然后密封培養(yǎng)箱，通過加熱或其他方式讓消毒劑揮發(fā)，使其在培養(yǎng)箱內(nèi)擴(kuò)散，對(duì)空氣和各個(gè)表面進(jìn)行消毒。熏蒸時(shí)間一般根據(jù)培養(yǎng)箱的大小和消毒劑的濃度而定，通常需要數(shù)小時(shí)甚至更長(zhǎng)。消毒結(jié)束后，要充分通風(fēng)換氣，去除殘留的消毒劑氣味和毒性，以免對(duì)后續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生不良影響。
三、消毒滅菌后的注意事項(xiàng)
通風(fēng)換氣無論采用哪種消毒滅菌方法，消毒完成后都需要對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)箱進(jìn)行充分的通風(fēng)換氣，將殘留的消毒劑氣味、霧氣等排出箱外，讓培養(yǎng)箱內(nèi)的空氣質(zhì)量恢復(fù)到正常狀態(tài)，為細(xì)胞培養(yǎng)創(chuàng)造一個(gè)良好的環(huán)境。
檢測(cè)無菌效果為了確保消毒滅菌效果，可以在消毒后的培養(yǎng)箱內(nèi)放置一些無菌指示劑，如無菌試紙、菌落測(cè)試片等，經(jīng)過一定時(shí)間的培養(yǎng)后，觀察指示劑的變化情況，判斷培養(yǎng)箱內(nèi)是否達(dá)到了無菌狀態(tài)。如果發(fā)現(xiàn)仍有微生物存在，需要重新進(jìn)行消毒滅菌操作。
盡快放入已消毒物品并開始使用經(jīng)過消毒滅菌后的細(xì)胞培養(yǎng)箱，應(yīng)盡快將已經(jīng)過消毒處理的實(shí)驗(yàn)器具、培養(yǎng)液等物品放入其中，然后啟動(dòng)培養(yǎng)程序，避免長(zhǎng)時(shí)間空置導(dǎo)致外界微生物再次污染。
總之，細(xì)胞培養(yǎng)箱的消毒滅菌工作需要嚴(yán)謹(jǐn)對(duì)待，選擇合適的消毒滅菌方法，并嚴(yán)格按照操作規(guī)程執(zhí)行，才能保證細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的無菌和穩(wěn)定，為細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的成功提供有力保障。
